免疫組庫(Immune Repertoire,IR)是指某個個體在任何特定時間點其循環系統中所有功能多樣性B淋巴細胞和T淋巴細胞的總和。T細胞和B細胞分別介導機體的細胞免疫和體液免疫應答,分別通過其表面的T細胞受體(TCR)和 B細胞受體(BCR)來識別和結合抗原,進而發揮功能清除病原體或體內腫瘤細胞。
免疫組庫高通量測序是通過多重PCR或SMART RACE法擴增TCR/BCR全長或CDR3區序列(主要是TCR的β鏈或BCR的重鏈),再結合高通量測序技術,對機體免疫組庫的多樣性及每種 T、B細胞克隆的獨特性序列組成和變化進行分析,從而全面評估機體的免疫狀態,明確疾病與T、B細胞克隆組成及變化之間的關系。隨著免疫組庫高通量測序技術的不斷發展和成熟,基于免疫組庫多樣性變化特點的生物標志物發現、腫瘤等疾病療效預測、疾病的易感性和抵抗性、感染性疾病及疫苗研究等方面都取得了重要進展。
數據量:1G raw date/樣
(5) 如果客戶自提 RNA,建議最好用進口試劑或試劑盒提取,最后溶于無RNA酶的水中。如果是分離的PBMC,RNA濃度大于50ng/μL,總量大于500ng。如果用組織提 RNA,濃度>500ng/μL,總量>5μg。
(5)運用國際認可的專業的免疫組庫分析模塊,并結合我們自己獨有的生物信息分析算法,所提供的標準化的分析流程即可滿足科研或臨床所需。另外我們還可提供數據的深度分析服務(需另收費).
(9)樣本間共有克隆分析
RNA提取和質檢-SMART RACE法擴增-文庫構建-上機測序-標準信息分析-高級信息分析
T淋巴細胞通過特異性T細胞受體(TCR)識別抗原肽,在人類適應性免疫應答中扮演著重要角色。TCR多樣性與宿主免疫反應及腫瘤預后密切相關。盡管腫瘤浸潤性T淋巴細胞對腫瘤預后有一定的影響,但很少有研究對乙型肝炎病毒(HBV)相關肝細胞癌(HCC)中的腫瘤組織和非腫瘤組織中的TCR多樣性進行詳細地特性描述。本研究對來自48位HBV相關HCC患者的肝癌腫瘤組織進行免疫組庫測序。與癌旁組織相比,腫瘤組織CDR3氨基酸(aa)克隆型具有顯著較高的平均數(2259 vs.1324,p<0.001),TCR多樣性顯著升高(Gini協同系數,p<0.001;Simpson指數,p<0.01;Shannon熵,p<0.001)。對中央Morisita-Horn相似指數(MHSI)的分析顯示,在腫瘤組織與癌旁組織之間TCR庫相似性較弱。本研究在肝癌患者腫瘤中觀察到T淋巴細胞具有廣泛的異質性,以及在相鄰癌旁組織中有較高的HEC。腫瘤組織和癌旁組織中差異化T細胞庫顯示了乙肝相關性肝癌患者體內獨特的T細胞免疫微環境。
圖2 CDR3 aa克隆類型多樣性的分析
拉斯穆森腦炎(Rasmussen encephalitis, RE)是一種罕見的兒科癲癇疾病伴隨有半腦炎癥和進行性神經系統缺陷。為了闡明RE的免疫反應過程,德國明斯克大學神經學研究所對RE患者的22例血液,2例腦脊液,和5例腦組織切片樣本還有兒科樣本參照進行T細胞受體(TCR)測序。RE患者樣本表現為外周CD8+T細胞的擴散程度與疾病的嚴重程度相關。此外,在CNS中,RE是唯一的具有T細胞擴散的兒科癲癇疾病。同時提示在RE中,外周擴散的CD8+淋巴細胞的抗原特異性會侵害CNS,可通過限制其進入CNS來改善。
適應性免疫系統的保護機體的能力是需要不同的淋巴細胞抗原受體完成的。然而個體差異基因和后天因素導致的差異和影響還沒有被完全闡釋。斯坦福大學醫學院通過對5對同卵雙生雙胞胎的B、CD4+ T和CD8+ T淋巴細胞進行分析,來量化遺傳因素在V(D)J重組過程和胸腺選擇中的影響。選取PBMC進行RNA提取后利用反轉錄獲得目的片段并構建免疫組文庫,使用Miseq進行2x300 bp測序,最后分析免疫組庫的差異性。