雙熒光素酶報告基因檢測（microRNA 靶基因驗證）
（1）技術原理
雙熒光素酶報告基因實驗也是驗證microRNA與靶基因或靶位點相互作用的常用技術。miRNAs常與靶基因的非翻譯區(qū)（常為3’UTR）結合，從而抑制整個mRNA的翻譯。在體外驗證實驗中，常將預測靶基因的3’UTR或預測靶位點構建至熒光素酶編碼區(qū)的下游，從而根據(jù)發(fā)光情況判斷mRNA與預測靶基因的直接作用關系。
（2）技術應用
microRNA廣泛存在于動物、植物、真菌及病毒的基因組中，調(diào)控生物體生長發(fā)育和各種疾病發(fā)生等過程中相關基因的表達。它的異常表達可能會導致生理狀態(tài)的異常和疾病的產(chǎn)生，在多種癌癥中，miRNA的表達水平會發(fā)生明顯改變，有可能引起原癌基因和抑癌基因的異常表達，從而導致腫瘤的發(fā)生惡化等。此外，在許多其他的病變組織或細胞中也檢測到了miRNA的異常表達。miRNA可同時調(diào)控多個靶基因，從而影響細胞的功能。miRNA調(diào)控靶基因的驗證常是熒光報告素酶活性檢測，結合軟件預測及蛋白驗證，提高靶點預測的精確性及可行性。
【服務內(nèi)容】
構建熒光素酶載體（或客戶自備載體）；細胞培養(yǎng)與轉染；熒光素酶檢測；數(shù)據(jù)分析。
【客戶須知及標本要求】
（1）客戶須明確檢測目的和具體要求，最好能提供1~2篇文獻或資料；
（2）客戶可自備載體；
（3）客戶需提供：miRNA與靶基因的信息；相應檢測細胞株。
